作為流動(dòng)相甲醇和乙腈有什么不同？
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1.吸光度：乙腈HPLC吸收最?。ㄌ貏e是在短波長上小）。所謂HPLC級(jí)是除去具有吸收UV的雜質(zhì)，在規(guī)定的波長上吸光度限制在規(guī)格值以內(nèi)。在UV檢測(cè)時(shí)，產(chǎn)生的噪聲小，因此在進(jìn)行UV短波長上的高靈敏度分析時(shí)乙腈HPLC級(jí)最適宜。另外，在UV檢測(cè)中的梯度基線上也是乙腈HPLC級(jí)產(chǎn)生鬼峰少，雖然，其他與水相溶性高的有機(jī)溶劑有各種各樣，但很難能找到比乙腈HPLC級(jí)吸收更小的。
2.壓力：乙腈低。根據(jù)有機(jī)溶劑的種類或混合比率的不同而異,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率與輸液壓力的關(guān)系中,甲醇與水混合,壓力增高,而乙腈同樣與水混合且并不如此.所以,乙腈一方,在同樣的流速下不在柱內(nèi)加上多余的壓力.從上述兩項(xiàng),可以確認(rèn)使用乙腈的意義,那么,甲醇除了價(jià)格以外,還有沒有其化優(yōu)點(diǎn)呢?
3.洗脫能力：一般而言,乙腈較強(qiáng).乙腈和甲醇分別用同樣的比率與水混合時(shí),一般情況下,乙腈的洗脫能力強(qiáng).特別是混合比率低時(shí),從咖啡因和苯酚的洗脫來看,獲得同樣的保留時(shí)間,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有機(jī)溶劑100%或與此極接近時(shí),從胡蘿卜素和膽甾醇來看,常常都是甲醇的洗脫能力強(qiáng).混合比在50比1等較為特殊時(shí),調(diào)制的誤差大,影響保留時(shí)間,或平衡化的時(shí)間長,乙腈遇到這種情況時(shí),用甲醇的10比1混合代替乙腈,這樣操作方便些.溶劑受溫度影響時(shí),不采用容器定量,而采用重量的方法(考慮比重),可使混合比的誤差減小.
4.分離(洗脫)的選擇性.兩者的差異：乙腈和甲醇在分離的選擇性上不同.由于有機(jī)溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)(甲醇和乙醇是質(zhì)子性,乙腈和四氫呋喃是非質(zhì)子性)不同所致.因此,在用乙腈類不能獲得分離的選擇性,就試用甲醇類看看.
5.峰形：用時(shí)出現(xiàn)差異.像水楊酸化合物(在鄰位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈類時(shí)拖尾大,用甲醇類可抑制.可是,一般情況下,聚合物類反相柱,與硅膠柱相比,更具有峰形寬的傾向,特別是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等時(shí)常見.這在流動(dòng)相是甲醇時(shí)非常顯著,而用乙腈時(shí)不明顯.為此,用聚合物類反相用柱時(shí)建議采用后者(乙腈類),這是因?yàn)橐译媸鼓z膨潤.
6.流動(dòng)相的脫氣：甲醇與水混合時(shí)發(fā)熱,多余的溶解空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀?脫氣容易).而乙腈由于吸熱冷卻,隨著慢慢回到室溫,產(chǎn)生氣泡,所以要考慮脫氣 (加溫?cái)嚢?過濾膜,He脫氣等).
結(jié)論：以上反相色譜法流動(dòng)相常用的乙腈和甲醇進(jìn)行了比較.粗略地講是,使用乙腈HPLC級(jí)最好,在選擇性,峰形差時(shí)試用甲醇HPLC,但根據(jù)各種不同性質(zhì)設(shè)計(jì)分析條件也是必要的。
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